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凝胶层析蛋白纯化系统分离纯化方法
发布时间:2017-08-24   点击次数:573次
凝胶层析蛋白纯化系统要利用不同蛋白间内在的相似性与差异,利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染,而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异,利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。
凝胶层析蛋白纯化系统大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段二个阶段。
 
凝胶层析蛋白纯化系统分离纯化方法如下几点:
(1)根据分子大小不同的分离方法:透析和超过滤(利用蛋白质分子不能通过半透膜);密度梯度离心(蛋白质在介质中离心时质量和密度较大的颗粒沉降较快);凝胶过滤(一种柱层析);
(2)利用溶解度差别分离:等电点沉淀法)由于蛋白质分子在等电点时净电荷为零,减少了分子间静电斥力,因而容易聚集沉淀,此时溶解度zui小);盐溶与盐析(利用一定浓度盐溶液增大或减小蛋白质的溶解度);
(3)根据电荷不同的分离方法,主要包括电泳和离子交换层析分离;
(4)蛋白质的选择吸附分离(利用颗粒吸附力的强弱不同达到分离目的);
(5)根据配体特性的分离——亲和层析(利用蛋白质分子与另一种称为配体的分子能够特异而非共价地结合这一生物性质)。

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