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疏水性层析蛋白纯化系统进行蛋白纯化分三步
发布时间:2018-05-28   点击次数:514次
疏水性层析蛋白纯化系统进行蛋白纯化有三步:
  捕获——从细胞其它成份,比如DNA和RNA中分离需要的蛋白;
  区分——从与目的蛋白具有相近的大小,或者相似的物理/化学特征的污染物中分离蛋白;
  修饰——使分离得到的样品处于可使用状态。
 
疏水性层析蛋白纯化系统捕获步骤,也就是从细胞裂解物粗成份中分离蛋白,这需要一个具有高容量和高流量的填料。bead大小比较大,范围比较宽的“fast flow”填料比较理想,这种填料也有利于防止目标蛋白被水解——因为速度比较快。
 
疏水性层析蛋白纯化系统区分对分辨率要求更高,需要更好的从混合物中分离需要的成份。通常bead的大小与分辨率成反比,因此在这一部中比较小的bead比较合适。吸附性的技术,比如离子交换IEX和疏水作用HI通常被用在纯化的这前两个步骤,而凝胶过滤则会留到了zui后的修饰那一步,用于小体积,高浓度的样品。另外要注意,进行凝胶过滤层析时,样品的体积应该保持在柱床体积的1%到4%。
 
选择柱料的时候有两个因素要考虑到,针对目的蛋白的选择性和有效性——这些可以由洗脱峰的宽度来说明。其中选择性主要是指填料与目的蛋白相互作用以及结合的能力,IEX和HI层析方法就是指目标分子与筛分介质之间的相互作用,而GF的选择性依赖于填料的分馏范围。

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