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亲和层析蛋白纯化系统层析方法步骤
发布时间:2015-11-04   点击次数:913次
亲和层析蛋白纯化系统使用前才添加成10 mM β-mercaptoethanol.
Buffer B-300/20: Buffer B-300/0 加有20 mM imidazole
Buffer B-300/250: Buffer B-300/0 加有250 mM imidazole
 
亲和层析蛋白纯化系统方法步骤:
1、亲和层析胶体1mL已经装填在管柱内,成为一淡蓝色胶柱。请把管柱架直在铁架上,去除下方的填塞物,用bufferB-300/0流洗20mL后塞住出口,准备注入样本。  
2、除去胶面上方的缓冲液,并取出样本(IEX)使其回到室温,慢慢用滴管加到亲和胶体上,小心勿弄乱胶体表面;让样本没入胶体中,同时收集流出液每管2.5mL。
3、待样本全部进入胶体后,关闭出口,再慢慢加入bufferB-300/20,打开出口收集流出液;bufferB-300/20共流洗30mL。
4、接着以bufferB-300/250流洗30mL,方法同上,收集。
5、所有收集均定量蛋白质并测定酶活性,取收集酶活性zui高的数个,共得多少mL(AF),保留100μL以供分析。

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