亚洲彩票 > 企业动态 > 金属螯合蛋白纯化系统的具体使用方法

企业动态

金属螯合蛋白纯化系统的具体使用方法
发布时间:2018-11-22   点击次数:270次
金属螯合蛋白纯化系统使用方法
对于通过AKTA纯化系统纯化,可直接连接预装柱使用:对于一般紫外检测,可通过产品附带的鲁尔接口将蠕动泵、橡胶管、鲁尔接口、预装柱、紫外检测器连接,操作简单,快捷。
①平衡
镍螯合琼脂糖凝胶柱用2~5个柱体积的初始缓冲溶液进行平衡。
建议线性流速为100cm/h。
②上样
(1)样品一般溶解于pH6~8的初始缓冲液中。提高上样缓冲液的pH值可以增大载量。
(2)缓冲液中不能含有EDTA和柠檬酸盐,同时避免巯基乙醇、DTT等还原剂。
(3)常用缓冲液有10~100mM磷酸钠缓冲液、20~200mMTris-HCl缓冲液等。
(4)缓冲液中一般要加入0.15~0.5M的NaCl以消除离子交换作用。
(5)初次使用镍螯合琼脂糖凝胶时,推荐使用50mMPBS作为初始缓冲液。
③洗脱
(1)增加咪唑浓度进行洗脱是镍螯合琼脂糖凝胶常用的洗脱方法。
(2)咪唑为碱性,相应缓冲液配制后需要用HCl调节pH值。
(3)初次使用镍-琼脂糖凝胶FF时,如不确定洗脱需要的咪唑浓度,推荐在初始缓冲液中加入咪唑,浓度从低
到高分别洗脱和收集重组蛋白,之后通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱结果。
(4)有条件的可以进行咪唑梯度线性洗脱以确定较佳的洗脱条件。
洗脱方法
(1)降低pH洗脱:大多数蛋白在pH6~4会被洗脱下来,缓冲液可以是醋酸钠、柠檬酸和磷酸盐缓冲体系。
(2)竞争性洗脱:线性增加或一步增加同金属离子有亲和力的竞争物质的浓度。梯度洗脱在起始缓冲液的恒定pH值下进行。
(3)螯合剂洗脱:EDTA、EGTA等螯合剂可同金属离子产生作用力,导致蛋白被洗脱下来。此法不能分离不同的蛋白,还会影响蛋白的吸附,导致融合蛋白无法挂柱。
注:降低pH洗脱和螯合剂洗脱会使得金属离子脱落,下次使用前需要重新螯和金属离子。常用的方法为竞争性洗脱。

分享到:

返回列表 | 返回顶部
网站亚洲彩票 公司简介 产品中心 应用案例 技术支持 企业动态 联系我们
上海金达生化仪器亚洲彩票官网(www.scgaozhan.com)主营产品导航:离子交换蛋白纯化系统,分子筛层析蛋白纯化系统,金属螯合蛋白纯化系统,DEAE蛋白纯化系统
版权所有 总访问量:96563
电话:021-64502702 传真:021-64502103 地址:上海市剑川路2号右侧二楼
GoogleSitemap 技术支持:中国化工仪器网 管理登陆 ICP备案号:
 

推荐收藏该企业网站
优优彩票网 荣鼎国际官网 盛通彩票 亚洲彩票注册 荣鼎国际网 盛通彩票网 优优彩票APP 亚洲彩票app 荣鼎国际网 亚洲彩票平台