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金属螯合蛋白纯化系统的形状和优势
发布时间:2019-08-25   点击次数:78次
金属螯合蛋白纯化系统的形状:
蛋白质在离心通过溶液运动时,或通过膜、凝胶过滤填料颗粒或电泳凝胶中的小孔运动时,都会受到形状的影响。对两种相同质量的蛋白质而言,球状蛋白质具有较小的有效半径(斯托克半径),通过溶液沉降时遇到的摩擦力小,沉降较快而显得比其它形状的蛋白质大;反之,在体积排阻色谱时,斯托克半径较小的球状蛋白质更容易扩散进入凝胶过滤填料颗粒内部,较迟洗脱出来,因而显得比其它形状的蛋白质要小。
 
金属螯合蛋白纯化系统的优势在于:
(1)N-端的His-Tag与细菌的转录翻译机制兼容,有利于蛋白表达;
(2)采用I固定化金属离子亲合层析纯化融合蛋白操作更加简便;
(3)对目的蛋白本身特性几乎没有影响,不会改变目的蛋白本身的可溶性和生物学功能;
(4)非常小,一般不影响蛋白质的功能,且在融合蛋白结晶后对蛋白的结构没有影响;
(5)免疫原性相对较低,可将纯化的蛋白直接注射入动物体内进行免疫并制备抗体;
(6)与其它亲和标签构建成双亲和标签,并可应用于多种表达系统,纯化的条件温和;融合蛋白的适用范围也较广,既可以在非离子型表面活性剂存在的条件下纯化,也可以在变性条件下进行纯化。前者通常用来纯化疏水性强的目的蛋白,而后者则通常纯化包涵体蛋白。

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