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分子筛层析蛋白纯化系统的应用范围和操作步骤
发布时间:2020-03-11   点击次数:984次
   分子筛层析蛋白纯化系统具有分子筛作用的物质很多,如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。以葡聚糖凝胶应用较广,从G10到G200,它的主要应用范围是:
  ①分级分离各种抗原与抗体;
  ②去掉复合物中的小分子物质。如除盐、荧光素和游离的放射性同位素以及水解的蛋白质碎片;
  ③分析血清中的免疫复合物;
  ④分子量的测定。
 
  分子筛层析蛋白纯化系统的操作步骤:
  1.打开电脑,进入AKTA系统。
  2.打开AKTA电源,连接系统。
  3进入UniCorn系统。
  4.用水洗A泵。
  5.设置层析柱的压力上限及适当的流速。
  6.将Superdex200TM层析柱或Superdex75TM层析柱与FPLC连接。
  7.用至少1个柱体积的水冲洗层析柱。
  8.用至少1个柱体积的缓冲溶液平衡层析柱。
  9.将准备好的样品于4℃,12000rpm离心10-20min。
  10.在Load状态下通过上样环上样。
  11.在Inject状态下样品进入系统,并在2mL时调回Load状态。
  缓冲液(流动相)和样品流过柱子,分子进入不同的材料孔中。小一些的分子移动的距离更。

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