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凝胶层析蛋白纯化系统的样品是怎样制备的
发布时间:2020-05-24   点击次数:57次
   凝胶层析蛋白纯化系统采用高度灵活配置的模块化设计,具有许多优点来进行快速、灵活、稳定的纯化。?KTA?pure硬件的所有阀门、检测器和层析柱均面向操作者安装,方便科研人员清楚、直观地了解各个模块之间的关系和样品以及缓冲液的流路。?KTA?pure将样品环上样改进为直接上样,入口可实现系统和层析柱的自动清洗。科研人员从一个纯化任务转向另一个纯化任务仅仅需要几分钟,在保持准确性和确保重复性的同时,大大地节省制备时间。
 
  凝胶层析蛋白纯化系统的样品制备:
  1.样品必须澄清,没有颗粒状物,否则容易堵塞层析柱。
 
  2.样品缓冲液:样品缓冲液的pH、离子强度和组成不会显著性影响结果的分辨率,只要这些参数不影响被分离蛋白质的大小和稳定性,也不超出填料的稳定范围。
 
  3.样品浓度:凝胶过滤分离效果与样品量无关,因此与样品浓度也没有关系。通常蛋白浓度不要超过60mg/mL。样品的溶解性和粘度会限制样品浓度,关键在于样品相对于流动相的粘度,太高的样品粘度会引起分离的不稳定性和不规则的流动形式,会导致非常宽和成串的峰形,反压也会增加,因此对于粘度大的样品需要进行稀释。
 
  样品体积:在凝胶过滤中,这是重要的参数之一。一般推荐上样的体积在1-30%之间,可以做梯度实验,确定较佳的上样体积。

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