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疏水性层析蛋白纯化系统操作规程
发布时间:2015-11-12   点击次数:1124次
1、使用前,根据自己所要分离蛋白的性质确定所需的分离柱及缓冲液,打开计算机及仪器,但不要急于打开软件,等计算机与仪器连接再打开软件,此过程大约需要3-5分钟。
2、将纯水先抽滤脱气(使用≤0.45μm的滤膜),然后选择流路连到机器上,先洗泵,然后给机器一个流速和压力。选择的zui高压力须小于柱子所能承受的压力极限。
3、将柱子连接到仪器上,接柱子时,须等进液管中的液体出来,将柱子的一头与进液管通过接头连接,先不要拧的太紧,等液体从柱子的另一头流出,再用接头将其与出液管相连拧紧,再将进液管端拧紧,这样防止柱子中进入气泡,影响分离效果。
4、柱子接上后,换上配好的缓冲液(须抽滤脱气)用缓冲液平衡至仪器的各条基线都平后,再上样。
5、上样时,必须通过滤膜过滤(0.22μm),具体上样体积视样品浓度而定,采用不同的上样环上样。
6、仪器使用完毕,切记要用纯水清洗泵和柱子,洗柱直至各条基线都平为止,防止盐和粒子结晶于泵和柱子使机器报废。若长期不用,再用20%的乙醇清洗系统和柱子,防止泵和柱子生长微生物(这一步非常重要)。
7、仪器的PH计每隔一段时间(一个月)须校准一次。紫外流动池也需定期清洗(三个月)。

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